再循环液体冷却液的效果远远大于风冷系统,能够驱散“过剩”热量。高效散热在毛细管电泳中至关重要,这样一来,可以利用导电率更高的缓冲液和内径更大的毛细管。
优点是样品载荷的灵活性更高,而且,如果使用离子强度更高的缓冲剂,可以获得更高的分离效率。这有助于方法从方法开发实验室更轻松地转移到常规使用环境中。
可以从 96 孔板、2 mL 自动进样器瓶、PCR* 瓶和 0.5 mL 试管自动进样。自动化当然是一种减少多种实验室瓶颈的方法。其中一个主要瓶颈是样品处理。使用 96 孔板作为进样容器不仅可以提升系统容量,而且还可以实现与使用 96 孔板格式的自动化样品制备设备的兼容性。此外,可能会使用 2 mL 小瓶(自动进样器行业标准);或者可以直接从 PCR* 瓶和微量离心管进样
分离模式包括:电压、电流、功率、压力和真空。所有电泳分离都可实现步进和线性梯度的编程,以及毛细管两端压力或真空的同步应用。电压梯度编程有利于胶筛分技术,可以在广泛片段尺寸范围内改善分离性能。这对于核酸的分离尤其重要。同步电压和压力的应用有利于等电聚焦电泳期间蛋白质的高效移动,还能够检测出物质有无迁移出毛细管。同时,多种 CEC 方法已经指定在进出口储液器使用同步压力。此系统与这些方法兼容。
模块化高灵敏度可选波长紫外线检测器可以利用一个总成中的七个滤光片,允许在一次操作中更改波长。毛细管电泳的检测器灵敏度非常重要,因为引入的质量负载较小,而且使用的检测路径长度也小(由毛细管尺寸决定,即 25 - 200 um)。滤光轮总成中的固定波长检测能够最大程度地提高检测器灵敏度,同时可在一次操作中更改波长。在质量控制或监管环境中,这有利于在开发出一种方法后即将其锁定,以保持数据的完整性。PA 800 高灵敏度紫外线检测器能够从可追溯至 NIST 的滤光片配置成“单一”波长,从而大大简化仪器认证和方法验证。此外,系统采用完整的光纤技术,无需通过光学实验台。这降低了检测系统的噪声(通过消除可能发生能量损失的反射面)并简化了系统,使其在常规用途下更为实用。
32 Karat™ 软件包括以下 GLP/CGMP 合规性特性:1) 原始方法与样品数据一起储存。2) 原始数据不能覆盖。3) 仪器会记录所有主要事件。4) 软件安全性包括针对多级别操作员访问权限的密码保护。许多实验室都被法律强制要求遵守现行药品生产管理规范 (CGMP) 和良好药品实验研究规范 (GLP)。32 Karat™ 软件提供了有助于多种维护数据完整性的功能。打开 GLP 标志后,样品数据和方法参数将无法重写或覆盖,从而确保生成的数据符合要求。要跟踪仪器操作,需要将包括错误在内的所有事件记录到系统中。为了确保操作的安全性,用户可能会被赋予不同的安全等级,选择性获得以下操作的权限:系统配置、方法编程、数据再处理、特定的仪器操作和数据比较。在操作灵活性非常关键的实验室,所有这些功能都可以用来“锁定”系统,用于监管用途或将登录状态设为“关闭”。
毛细管电泳需要专门的数据处理。32 Karat™ 软件提供专门的毛细管电泳计算,包括:表观淌度、淌度、校正峰面积、分子量和等电点。该软件还包括系统适用性,将在启动适用性决策时使用这些计算结果。适用性算法能够触发回注、方法暂停、方法中止,或在出现故障时运行关闭方法。淌度计算可以建立不受电渗流量、电压、温度和色谱柱尺寸变化影响的化合物同一性。这在化合物鉴定和方法验证方面非常有用,尤其在比较分析条件略有不同的不同实验室间的数据时更是如此。不过,计算这个值必须利用实际电压值,而非仅仅编程值。由于毛细管电泳检测为柱上检测,将峰面积归一化到化合物速率非常重要。表征蛋白质时,能否计算蛋白质分子量和等电点至关重要。
温度调节可以独立于电泳缓冲液控制样品。样品温度保持在 4º~60ºC 之间。样品温度控制有利于最大程度地降低易受温度变化影响的化合物的降解,同时控制酶促反应动力学的反应速率。不过,(在调节样品温度时)有必要确保电泳缓冲液的温度不受影响。降低缓冲剂、洗涤剂、高盐或手性添加剂的温度会导致沉淀。此外,由于冷却缓冲液而导致的温度梯度可能会对分离效率、峰对称性甚至重现性产生不利影响。
使用以下三种进样模式之一进样:动电、压力和真空。每个模式都可以实现对所有进样参数的变量控制,并且可以从毛细管两端进样。所有进样模式都可以从毛细管两端进样。仪器可以使用所有常用进样模式且能够指示参数(即注射压力或真空),简化了在其他品牌仪器上开发的方法的转移。毛细管两端均可进样,能够完全从同一个毛细管进行快速低分辨率筛查和高分辨率分析。
二极管阵列可以为毛细管电泳提供高分辨率光谱扫描检测。毛细管电泳的峰效率远高于 HPLC,让传统“快速扫描”检测器的扫描变得无法满足需要。二极管阵列检测可以在不影响分辨率的情况下提供高质量光谱信息。提供卓越的光谱分辨率,这让数据库搜索算法更加强大,即使存在较大的分析物浓度差异,也能更准确地鉴定化合物。使用 32 Karat™ 软件后,可以实时查看、收集和分析四个通道的数据。在一次运行过程中,可以查看扫描范围内的任何波长,而且运行之后,还可以任意选择波长进行提取和分析。这样一来,由于可以访问所有数据,操作员可以实时做出方法开发决策。
这些系统使用内部水银灯校准二极管阵列检测器,从而提供出色的波长准确度 (± 1 nm) 和精度。这最终可以提高系统的适用性和重现性。
使用 CAESAR 集成算法可以获得更低的定量限。从本质上说,毛细管电泳可以根据成分内在淌度的差异进行,并据此产生峰,这些峰通常为非高斯分布。这是分析物淌度相对于分离电解液淌度的函数。CE 基线也往往会展现更多的干扰性,出现偏差,因为现在经常使用更低的检测波长,给传统的集成算法带来挑战。CAESAR 算法已针对 CE 数据精简优化,通过移动中值数据滤波降低定量限。有记录表明,使用这种针对 CE 分析优化的数据精简方法,LOQ 可提高五倍。
提供从多种标准品的自动化共进样并结合进样。进样可以自动加入参考定位标准品,用于定位或阳性鉴定。这有助于最大程度地减少样品基质效应带来的错误。此外,对于高盐样品,可能需要在同一次运行期间实施多次注射,以利用动电盐洗脱步骤。实际示例包括在放大后直接动电注射 PCR *样品。如果无法在进样前从 ddH20 执行动电洗脱,则需要通过样品处理步骤移除干扰盐和金属。此外,在样品表开始运行后,生成的数据可能显示需要运行新样品组合。使用 32 Karat™ 软件可以实现动态样品表编辑,从而能够将新样品添加到正在运行的序列中。
高灵敏度激光诱导荧光检测可以扩展毛细管电泳分析碳水化合物、核酸和其他化合物的能力,这些物质要么可以自然发出荧光,要么可以通过样品衍生发出荧光。LIF 可以为任何分析提供选择性和灵敏度,而且针对可以发出荧光的化合物,其灵敏度通常比紫外线高出 500 倍。LIF 探测器采用模块化配置,可以使用两个激光源(即 488 nm 和 635 nm)同时激发。可以同时收集两个不同的波长。如果您想在一次运行期间同时运行样品和标准品,需要使用两种“颜色”区分两个种类,这一点非常重要。
允许在一个仪器平台上使用多种探测器,可以防范系统过时并降低成本。例如,可以通过改变探测器模块和锁定软件方法,快速将一个方法开发平台重新配置成常规用途平台。
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